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診斷

來源:重慶市疾病預防控制中心     發(fā)布日期:2019-10-22
1.臨診診斷:(1)高致病性禽流感:爆發(fā)時家禽大批急性死亡,產(chǎn)蛋停止,呼吸道癥狀,頭部、顏面部和頸部浮腫,無毛部皮膚(冠肉髯、腳部)發(fā)紺、腫、出血、壞死,白綠色下痢。(2)低致病性禽流感:無癥狀急性感染,死亡率為5%~15%,產(chǎn)蛋率下降5%~50%,呼吸道病變、氣管水腫、干酪樣滲出物、氣囊炎,腎臟腫大、尿酸鹽沉著。
僅根據(jù)臨診癥狀及剖檢病變,很難確診,必須進行實驗室診斷。
    2.實驗室診斷:(1)病毒分離:采取喉頭、氣管、肺、氣囊、肝、脾、腦及直腸內(nèi)容物等,置于加有青霉素10000單位/毫升,鏈霉素10000單位/毫升組織培養(yǎng)液或50%葡萄糖磷酸鹽緩沖液中4℃保存或運輸,不超過48小時。用上述溶液將病料制成10%乳劑-70℃保存或3000轉/分離心5分鐘,取上清液用0.2~0.45微米(220~450納米)的濾膜過濾除菌,取濾液0.3毫升,尿囊腔接種9~11日齡SPF雞胚,每份樣品至少接種5個雞胚。經(jīng)37℃孵化4天(剔除接種后 24小時內(nèi)死亡雞胚),置于4℃ 6~12小時殺死雞胚,吸取尿囊液,同時采取絨毛尿囊膜。尿囊液中若含有AIV時,HA試驗呈陽性。若初代尿囊液HA試驗呈陰性,需再傳一代,取尿囊液1:10稀釋接種0.3毫升/胚,再呈陰性則判斷為AIV感染陰性反應;若呈陽性,用ND抗血清進行HI試驗,若呈陰性反應時再結合以下血清學診斷可初步判定為AIV感染。(2)血清學診斷:利用AGP、ELISA方法可檢測A型流感病毒共有的特異性抗體或抗原,已鑒定的標準AIV制備的抗原可用檢測可疑雞群的血清抗體(此步驟可在病毒分離前進行)。將上述病毒分離時采用的雞胚尿囊膜用PBS(pH=7.2)洗凈,排盡囊中液體,研磨乳劑,反復凍融3次,3000轉/分,離心10分鐘,取上清液,用終濃度0.1%的福爾馬林經(jīng)37℃36小時滅活,即可用作AGP抗原(3個膜可制做約1毫升抗原)。用已知的標準抗血清與其進行AGP試驗,鑒定分離病毒。(3)病毒定型及定性:(H和N亞型):確定亞型需用已定型(H1~H5,N1~N9)的一系列單特異性抗血清做HI試驗,因此應交專門機構進行。(4)致病性(毒力)的測定:HPAIV的判定標準(美國家畜衛(wèi)生協(xié)會)。
     ①取1:10稀釋的感染尿囊液0.2毫升靜脈接種8只4~8周齡SPF雞,隔離飼養(yǎng)10天內(nèi)死亡6只或6只以上(致死率75%以上)。
    ②致死率1~5/8(75%以下),H5或H7亞型以外的病毒,在不加胰蛋白酶細胞培養(yǎng)中可增殖,并可形成CPE或蝕斑。
    此外,也可測定ICPI(腦內(nèi)接種致死指數(shù))來判定致病性,出雛40小時SPF初生雛10只,腦內(nèi)接種10個病毒,7天內(nèi)觀察記錄死亡情況,測定ICPI值,在1.5~2.0者可判定為HPAIV。
   (5)基因診斷:利用基因擴增(PCR)方法直接檢出病毒的基因,此方法較常規(guī)的病毒分離法速度快,特異性高,而且可克服因野外取料混有其他病毒造成的誤診。
一旦經(jīng)病毒分離、血清學試驗初步診斷為AI時,應立即報告國家有關獸醫(yī)機構,并將分離的病毒或采集的病料報國家指定的機構進行確診和定位。診斷過程中應嚴格執(zhí)行防污染、防擴散的操作程序。
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